噬菌體在水産細菌性病害防控的研究進(jìn)展

1、噬菌體的分類
噬菌體是一類能(néng)感染細菌的病毒，其特别之處是專以細菌爲宿主，跟别的病毒一樣，噬菌體隻是一團由蛋白質外殼包裹的遺傳物質，大部分噬菌體還(hái)長(cháng)有“尾巴”，用來將(jiāng)遺傳物質注入宿主體内（圖1）；根據噬菌體的核酸類型、基因組及其複制方式、形态特征、宿主菌的種(zhǒng)類等特點，將(jiāng)噬菌體分成(chéng)了 15 個科，其中 ds DNA 噬菌體有 10 個科; ss DNA 噬菌體有 2 個科; dsＲNA 噬菌體有 1 個科; ssRNA 噬菌體有 1 個科。還(hái)有一個未歸入科的鹽末端蛋白噬菌體屬。根據寄生方式的不同，噬菌體又可分爲裂解性噬菌體與溶源性噬菌體，在實際應用中，人們采用裂解性噬菌體來進(jìn)行噬菌體治療。

圖1 噬菌體的結構
2、噬菌體的分離純化方法
純化大多包含采樣、富集、分離、純化4個步驟。
2.1噬菌體的采樣
噬菌體釆樣的方式可分爲三種(zhǒng)，即直接法、間接法和誘導法。
直接法指直接從對(duì)象菌生活的生物體上取樣尋找噬菌體。
間接法指根據對(duì)象菌的特性，從相應的非生物環境中釆集樣品尋找噬菌體。
誘導法指利用對(duì)象菌感染相應的生物，并取樣尋找噬菌體，與直接法類似，所不同的是有誘導這(zhè)一步驟。
2.2 噬菌體的富集
富集也稱增殖，即將(jiāng)對(duì)象菌制成(chéng)菌懸液後(hòu)與樣品液共培養，基本原理是利用噬菌體的高增殖力，增加單位體積樣品中噬菌體含量即效價，提高分離噬菌體的成(chéng)功率。
2.3噬菌體的分離
富集後(hòu)將(jiāng)培養液離心和過(guò)濾，除去細菌和雜質，得到純噬菌體濾液，用于分離。包括雙層瓊脂平闆法、平闆塗布法和平闆傾注法三種(zhǒng)。
2.4噬菌體純化
初次分離得到的單個噬菌斑，其形态、大小常不一緻，需要進(jìn)一步純化。純化主要有液體純化法和平闆純化法兩(liǎng)種(zhǒng)。
3.噬菌體在水産中的研究與應用
李太武等用噬菌體裂解其宿主菌河流弧菌Ⅱ從而達到皺紋盤鮑防病治病的目的，發(fā)現與噬菌體吸附一定時(shí)間的河流弧菌Ⅱ失去毒性不能(néng)産生膿疱但可作爲活疫苗。李太武等分離到河流弧菌噬菌體，依據過(guò)量噬菌體可以裂解其宿主菌河流弧菌的特性，用噬菌體對(duì)皺紋盤鮑胺疱病進(jìn)行了生物防治研究。結果表明，使用一定濃度的噬菌體可以有效的治療或推遲膿疱病引起(qǐ)的鮑死亡，將(jiāng)鮑的成(chéng)活率提高。
蔺紅蘋等使用副溶血弧菌噬菌體治療對(duì)蝦弧菌病，結果表明施加噬菌體的實驗組, 對(duì)蝦死亡率明顯低于對(duì)照組, 實驗組發(fā)病對(duì)蝦症狀也較輕, 噬菌體使用濃度越高, 對(duì)蝦的發(fā)病程度越輕, 存活率就(jiù)越高（見表1）。
表1 噬菌體防治副溶血弧菌病的實驗結果

杭小英等采用滴注法檢測了噬菌體 NTHP01 對(duì)分離到的細菌的抑菌效果，結果表明，噬菌體 NTHP01 對(duì)芽孢杆菌、氣單胞菌、不動杆菌、腸杆菌、檸檬酸杆菌、原生節杆菌、鄰單胞菌、格氏乳球菌等均具有較好(hǎo)的裂解作用，接著(zhe)將(jiāng)噬菌體 NTHP01制劑在日本沼蝦養殖塘進(jìn)行示範應用，初步結果表明日本沼蝦産量提高 338～412 kg/hm2，産值提高 2.25萬～3.00 萬元/hm2。
4.噬菌體在水産養殖動物細菌性病害防控的優勢
4.1針對(duì)性強
傳統的抗生素在治療細菌性感染的同時(shí)，會(huì)殺滅消化道(dào)中的正常菌和有益菌，破壞微生态平衡，導緻其他耐受性緻病菌的生長(cháng)，進(jìn)而可能(néng)引起(qǐ)機體的免疫力下降而導緻全身性的感染。
4.2用量少
噬菌體具有指數式增殖的自我複制能(néng)力，隻需極少量即可殺滅相應的緻病菌，達到預防或控制細菌性感染的目的。
4.3篩選分離、保存成(chéng)本低
噬菌體環境豐度高，自然界中普遍存在細菌相應的噬菌體，易于分離且純化周期短，可常溫下保存，便于運輸和應用。
4.4無藥物殘留
使用抗生素會(huì)造成(chéng)藥物在養殖動物體内的殘留，而噬菌體高度依賴于相應的細菌，會(huì)随著(zhe)細菌宿主的消失而死亡，不會(huì)殘留在動物體内。
5.展望
雖然噬菌體療法應用于水産疾病防控具有諸多優勢，但是爲滿足其在水産養殖中的大規模實際應用，仍需要解決一系列關鍵性技術問題。如：①噬菌體的最适應用條件，如最佳治療時(shí)間、最佳治療劑量及最佳治療方式等都(dōu)需要進(jìn)行系統的研究來确定；②毒力基因轉移所帶來的潛在風險需要深入考察；③細菌對(duì)噬菌體産生的抗性問題。
對(duì)此以上都(dōu)是需要解決或需要進(jìn)行深入思考的問題，對(duì)噬菌體的研究還(hái)是有一定的意義與價值。
文章來源：水生動物健康評估
參考文獻
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