家禽生産中的噬菌體療法

　　對(duì)于在動物生産中使用抗生素引起(qǐ)細菌耐藥性後(hòu)果的關注，促進(jìn)了抗生素替代品研究的增多。噬菌體能(néng)殺死細菌，而且是天然的、安全的、豐富的。噬菌體能(néng)自我複制和自我限制，可特異性作用于目标病原體而不破壞共生細菌，并且具有不同的生物特性。這(zhè)些性能(néng)使噬菌體成(chéng)爲一個具有吸引力的抗生素替代品，特别适用于對(duì)抗生素有抗藥性細菌的控制。

　　噬菌體預防和治療動物疾病的療效，無論在實驗室還(hái)是在商業領域的研究中，幾乎可以在所有的生産動物上得以證明，而且對(duì)動物無任何副反應。
　　雖然噬菌體控制動物生産中顯著(zhe)疾病的潛在可能(néng)性已得以證實，但噬菌體療法并不代表著(zhe)一種(zhǒng)對(duì)抗生素的替代。
　　在動物生産系統的一些應用中，部分噬菌體療法優于使用抗生素，而另一些噬菌體療法則遜于使用抗生素。
　　此外，當抗生素和噬菌體結合使用時(shí)，治療動物疾病的效果可以提高。
　　禽傷寒噬菌體療法實驗
　　采用噬菌體治療禽傷寒是d’Hérelle完成(chéng)的。他從鳥類的排洩物中分離噬菌體，以0-4分級計分描述噬菌體的活性，并在噬菌體存在的情況下，傷寒爆發(fā)後(hòu)能(néng)夠存活的鳥之間表現出相關性。在對(duì)照試驗中，他將(jiāng)其他鳥接觸一直給予高活性噬菌體的鳥3d時(shí)間，并記錄發(fā)現這(zhè)些鳥獲得此噬菌體。然後(hòu)這(zhè)些鳥用沙門氏菌連續攻毒21d後(hòu)保持健康，而未接觸噬菌體的鳥則在單劑量口服感染禽傷寒後(hòu)3d内死亡。

　　在測試噬菌體治療家禽沙門氏菌感染的功效時(shí)，試驗鳥均在1日齡時(shí)口服攻毒鼠傷寒沙門氏菌106CFU，随後(hòu)口服給藥0.1ml1012PFU/ml的9種(zhǒng)不同噬菌體的1種(zhǒng)。這(zhè)些鳥進(jìn)行了21d以上檢測，選取的3種(zhǒng)噬菌體能(néng)夠顯著(zhe)降低死亡率，分别從53%（未經(jīng)處理的禽類）降至28%、22%和16%，這(zhè)些數據表明單獨的噬菌體治療沙門氏菌有不同的功效。
　　研究人員選擇三種(zhǒng)噬菌體中的其中一種(zhǒng)來進(jìn)一步研究對(duì)沙門氏菌療效的噬菌體效價。未處理家禽的死亡率爲56%，隻有當使用未稀釋的噬菌體時(shí)死亡率降至20%，而4倍稀釋組和2倍稀釋組，其死亡率分别從56%降低到44%、36%。這(zhè)些數據證實了噬菌體效價影響療效的重要性。
　　Lim等證明，把未用沙門氏菌攻毒的飼養在禽舍的雛雞，與用沙門氏菌攻毒的雛雞放在一起(qǐ)，當在飼料中按107PFU/g或109PFU/g比例添加噬菌體後(hòu)，其腸道(dào)沙門氏菌的定植顯著(zhe)減少。這(zhè)些實驗結果表明，在對(duì)雞用沙門氏菌攻毒前7d和攻毒後(hòu)21d飼喂添加噬菌體，能(néng)顯著(zhe)減少沙門氏菌的水平傳播。
　　禽壞死性腸炎噬菌體療法實驗
　　禽壞死性腸炎是由A型和C型産氣莢膜梭菌引起(qǐ)的，是一種(zhǒng)導緻高發(fā)病率和高死亡率的重要禽病。産氣莢膜梭菌普遍存在于家禽設施和感染該病已表現臨床症狀和未表現出臨床症狀的家禽中。

　　雖然使用抗球蟲藥和抗生素生長(cháng)促進(jìn)劑限制了壞死性腸炎的嚴重程度，但人們越來越關注的是，限制使用抗生素生長(cháng)促進(jìn)劑會(huì)增加本病在家禽生産中的發(fā)病率和嚴重程度。
　　有資料表明，一些國(guó)家停止使用抗生素飼料添加劑時(shí)，家禽壞死性腸炎增加25%-40%。随著(zhe)抗生素飼料添加劑的禁止使用，家禽養殖迫切的需要一種(zhǒng)能(néng)夠替代抗生素促進(jìn)劑來控制壞死性腸炎。
　　Miller等比較了使用類毒素疫苗和噬菌體産品治療家禽壞死性腸炎。噬菌體産品中含有5種(zhǒng)噬菌體，對(duì)産氣莢膜梭菌菌株具有廣譜活性。在兩(liǎng)項研究中，14日齡試驗鳥口服攻毒5*103個巨型艾美爾球蟲卵囊，随後(hòu)分别在19日齡、20日齡和21日齡（研究1）或分别在18日齡、19日齡和21日齡（研究2）用108CFU産氣莢膜梭菌口服攻毒。
　　一般來說(shuō)，噬菌體産品控制壞死性腸炎的效果比類毒素疫苗好(hǎo)，而且噬菌體産品控制壞死性腸炎的功效得以明顯證實。在第一項研究中有兩(liǎng)個噬菌體處理試驗組，第一組是在孵育到18d時(shí)卵内注射，随後(hòu)在孵化時(shí)通過(guò)噴霧使用，第二組噬菌體治療包括在19-22日齡時(shí)口服灌喂噬菌體，當鳥達到28日齡時(shí)研究得出結論。

　　總體而言，這(zhè)兩(liǎng)組噬菌體處理的鳥的體重，比用産氣莢膜梭菌攻毒而未經(jīng)噬菌體處理的鳥顯著(zhe)提高。兩(liǎng)組噬菌體處理組的飼料轉化顯著(zhe)好(hǎo)于用産氣莢膜梭菌攻毒而未用噬菌體處理組。
　　整個研究期間，鳥的總死亡率從産氣莢膜梭菌攻毒而未使用噬菌體處理組的56%，在兩(liǎng)個噬菌體處理組分别顯著(zhe)降低至18%和16%。
　　第二項研究類似于第一項研究，但得出的結論是在鳥達到42日齡時(shí)，并且經(jīng)杆菌肽治療，3個噬菌體處理組采用不同的方式：管飼法、混飲或混飼。
　　總的結果發(fā)現，鳥類給予管飼法或在混飼使用噬菌體治療的體重顯著(zhe)高于産氣莢膜梭菌攻毒組的體重。混飲使用噬菌體組的體重顯著(zhe)高于産氣莢膜梭菌對(duì)照組。所有噬菌體處理組的飼料轉化率顯著(zhe)強于産氣莢膜梭菌對(duì)照組。
　　産氣莢膜梭菌攻毒組壞死性腸炎導緻的死亡率爲64%，各噬菌體處理組分别下降至14%（管飼給藥組）、0%（混飲給藥組）和0.7%（混飼給藥組）。
　　大腸杆菌病噬菌體療法實驗
　　大腸杆菌病被認爲是在所有家禽生産中最重要的細菌性疾病。大腸杆菌病開(kāi)始爲大腸杆菌呼吸道(dào)感染，成(chéng)爲氣囊炎，主要是在出殼後(hòu)第一周，此時(shí)雞的免疫力還(hái)沒(méi)有完全建立。該感染可迅速擴散到全身，引起(qǐ)肝周炎和心包炎，導緻高發(fā)病率和高死亡率。家禽大腸杆菌病主要由禽緻病性大腸杆菌（APEC）引起(qǐ)，其中O1、O2、O35、O36、O78等5種(zhǒng)大腸杆菌血清型被認爲是家禽大腸杆菌病的主要病因。

　　研究人員將(jiāng)噬菌體與用于攻毒的大腸杆菌（104CFU/ml）混合，緊接著(zhe)以不同的多重性感染去攻毒1周齡的鳥。大腸杆菌攻毒後(hòu)2周結束實驗，鳥類死亡率爲85%。攻毒大腸杆菌培養物與104PFU噬菌體混合後(hòu)攻毒，鳥的死亡率顯著(zhe)降低至35%，并且攻毒大腸杆菌培養物與108PFU噬菌體混合後(hòu)攻毒，未導緻鳥死亡。這(zhè)個實驗證實了，噬菌體滴度對(duì)于治療功效的重要性。
　　研究人員在鳥7日齡時(shí)采用噬菌體氣溶膠噴霧給藥，分别采用立即用大腸杆菌（104CFU）攻毒（7日齡）、1d後(hòu)攻毒（8日齡）、3d後(hòu)攻毒（10日齡）3項不同的試驗。3項試驗完成(chéng)後(hòu)發(fā)現，當用噬菌體預處理後(hòu)用大腸杆菌攻毒，所有3項試驗鳥的死亡率顯著(zhe)降低。試驗結果表明，在雛鳥預防性使用噬菌體噴霧是有效可行的。
　　用大腸杆菌（104CFU）胸腔肺泡攻毒後(hòu)，噬菌體采用氣溶膠噴霧或肌内注射進(jìn)行治療的研究，證實了噬菌體治療大腸杆菌病的效能(néng)。鳥7日齡時(shí)用大腸杆菌攻毒，然後(hòu)立即在24h或48h用109PFU/ml的噬菌體肌内注射。研究得出的結論是在大腸杆菌攻毒後(hòu)2周，當時(shí)鳥爲3周齡，采用肌内注射給藥的噬菌體治療組，死亡率顯著(zhe)降低，其多次注射比單次注射更有效。
　　Barrow等也證實了用噬菌體治療家禽大腸杆菌病的治療功效。在這(zhè)些研究中同時(shí)以不同滴度的噬菌體肌内注射給藥，能(néng)夠顯著(zhe)降低通過(guò)肌内或顱内接種(zhǒng)大腸杆菌誘導的死亡率。
　　噬菌體滴度低于104PFU能(néng)顯著(zhe)降低大腸杆菌肌内攻毒誘導的死亡率，108PFU滴度的噬菌體能(néng)顯著(zhe)降低3周齡鳥顱内接種(zhǒng)大腸杆菌引起(qǐ)的死亡率，106PFU顯著(zhe)降低鳥孵化時(shí)大腸杆菌攻毒引起(qǐ)的死亡率。
　　Oliveira等公布了噬菌體在降低大腸杆菌病對(duì)商品家禽生産設施影響領域的應用研究。

　　在實驗室實驗中，鳥接種(zhǒng)大腸杆菌後(hòu)立即口服和噴霧給藥109PFU噬菌體，能(néng)顯著(zhe)降低死亡率、發(fā)病率和病理學(xué)等級。在現實的實地研究中，11個商品家禽群體被确認發(fā)生了大腸杆菌病。噬菌體通過(guò)混飲和噴霧給藥，治療1周後(hòu)，11個家禽群體中5個的死亡率被認爲控制在0.5%以下。第3周後(hòu)11個家禽群體中的10個死亡率得以控制。
　　這(zhè)項工作表明，噬菌體在商品家禽設施的實際應用，可以用于降低大腸杆菌病所造成(chéng)的死亡率。
　　Huff進(jìn)行了噬菌體與抗生素恩諾沙星對(duì)大腸杆菌病的療效比較，以及噬菌體和恩諾沙星聯合治療大腸杆菌病療效比較的研究。
　　試驗鳥在7日齡時(shí)用大腸杆菌攻毒，然後(hòu)用50*10-6恩諾沙星混飲7d治療，或在7日齡時(shí)單次肌内注射109PFU噬菌體，或噬菌體與恩諾沙星聯合治療。
　　恩諾沙星療法和噬菌體療法能(néng)夠將(jiāng)大腸杆菌陽性對(duì)照死亡率68%，分别顯著(zhe)降低到3%和15%。但是，恩諾沙星和噬菌體聯合使用保護率達到100%，這(zhè)種(zhǒng)協同作用比兩(liǎng)者獨自使用更爲顯著(zhe)。
　　Xie進(jìn)行了噬菌體與抗生素的功效比較研究，結果發(fā)現，用大腸杆菌攻毒家禽後(hòu)噬菌體治療比用抗生素氯黴素治療更有效。
　　（以上内容來源自《噬菌體治療—當前的研究與應用》）